dna粗提取與鑑定

實驗原理

dna粗提取與鑑定

DNA在氯化鈉溶液中的溶解度,是隨着氧化鈉的濃度的變化而改變的。當氯化鈉的物質的量濃度爲 2 mol/L時,DNA的溶解度最大,濃度爲 0.14 mol/L時,DNA的溶解度最低。利用這一原理,可以使溶解在氯化鈉溶液中的DNA析出。

DNA不溶於95%的酒精溶液,但是細胞中的某些物質則可以溶於酒精溶液。利用這一原理,可以進一步提取出含雜質較少的DNA。

DNA中含有脫氧核糖,能與二苯胺(沸水浴)反應生成藍色物質,因此,二苯胺可以作爲鑑定DNA的試劑。

目的要求

1. 學會DNA的粗提取和鑑定的方法。

2. 觀察提取出來的DNA物質的顏色和形狀。

材料用具

材料:活雞或鮮血雞血。

儀器:離心機、恆溫水裕鍋、載玻片,玻璃棒,濾紙,滴管,量簡(100 mL,l個),燒杯(100 mL,l個,50 mL、500 mL各 2個),試管(20 mL,2個),漏斗,試管夾,紗布。

試劑:酒精的體積分數爲95%的溶液(實驗前置於冰箱內冷卻24 h),蒸餾水,檸檬酸鈉的質量濃度爲 0.1g/mL的`溶液,氯化鈉的物質的量濃度分別爲 2 mol/L和0.015 mol/L的溶液,二苯胺試劑。

方法步驟

實驗前需要製備雞血細胞液(由教師完成),製備的方法是:取檸檬酸鈉的質量濃度爲 0.1 g/mL的溶液(抗凝劑)100 mL,置於500 mL燒杯中。將宰殺活雞流出的雞血(約180 mL)注入燒杯中,同時用玻璃棒攪拌,使血液與檸檬酸鈉溶液充分混合,以免凝血。然後,將血液倒入離心管內,用 1000 r/min的離心機離。2min,此時血細胞沉澱於離心管底部。實驗時,用吸管除去離。心管上部的澄清液,就可以得到雞血細胞液。

1.提取雞血細胞的細胞核物質

將製備好的雞血細胞液5 mL~10mL,注入到50 mL燒杯中。向燒杯中加入蒸餾水20 mL,同時用玻璃棒充分攪拌5 min,使血細胞加速破裂。然後,用放有紗布的漏斗將血細胞液過濾至500mL。取其濾液。

2.溶解細胞核內的DNA

將氯化鈉的物質的量濃度爲 2 mol的溶液40mL加入到濾液中,並搖動燒杯,使其混合均勻,這時DNA在溶液中呈溶解狀態。

3.析出含DNA的粘稠物

沿燒杯內壁緩緩加入蒸餾水,同時用玻璃棒不停地輕輕攪拌,這時燒杯中有絲狀物出現,注意觀察絲狀物呈什麼顏色。繼續加入蒸餾水,溶液中出現的粘稠物會越來越多。當粘稠物不再增加時停止加入蒸餾水(這時溶液中氯化鈉的物質的量濃度相當於0.14 mol/L)。

4.濾取含DNA的粘稠物

用放有多層紗布的漏斗,過濾步驟3中的溶液至 500mL的燒杯中,含 DNA的粘稠物被留在紗布上。

5.將DNA的粘稠物再溶解

取 1個 50 mL燒杯,向燒杯內注入氯化鈉的物質的量濃度爲 2 mol/L的溶液 20mL。用鈍頭鑷子將紗布上的粘稠物夾至氯化鈉溶液中,用玻璃擇不停地攪拌,使粘稠物儘可能多地溶解於溶液中。

6.過濾含有DNA的氯化鈉溶液

取1個100 mL燒杯,用放有兩層紗布的漏斗過濾步驟5中的溶液。取其濾液,DNA溶於濾液中。

7.提取含雜質較少的DNA

在上述濾過的溶液中,加入冷卻的、酒精的體積分數爲 95%的溶液 50mL(使用冷卻的酒精,對DNA的凝集效果較佳),並用玻璃棒攪拌,溶液中會出現含雜質較少的絲狀物。用玻璃棒將絲狀物捲起,並用濾紙吸取上面的水分。這種絲狀物的主要成分就是DNA 。注意觀察絲狀物是什麼顏色的。

的鑑定

取兩支20 mL的試管,各加入氯化鈉的物質的量濃度爲0.015 mol/L的溶液5 mL,將絲狀物放入其中一支試管中,用玻璃棒攪拌,使絲狀物溶解。然後,向兩支試管中各加入4mlL的二苯胺試劑。混合均勻後,將試管置於沸水中加熱 5 min,待試管冷卻後,觀察並且比較兩支試管中溶液顏色的變化。將觀察的結果填寫在《實驗報告冊》上。

結論

步驟8的2支試管中溶液顏色的變化說明了什麼?將得出的結論填寫在《實驗報告冊》上。

討論

1.提取雞血中的DNA時,爲什麼要除去血液中的上清液?

2.步驟回和步驟3中都需要加入蒸餾水,兩次加入的作用相同嗎?爲什麼?

的直徑約爲20×10-10 m,實驗中出現的絲狀物的粗細是否表示1個DNA分子直徑的大小?