檢驗技師考點:純化抗體

純化抗體通常用於直接檢測抗原。此時抗體標記有一個易於鑑定的標記物,用於結合和檢測所研究的抗原。在間接檢測抗原方法中,一抗不被標記,而是用標記的二抗(一種抗免疫球蛋白抗體)來檢測。一般而言,建議使用間接法。因爲許多商家能夠提供可靠的標記二抗,用間接法不僅省力,結果同樣可靠。 儘管如此,有幾種方法需要標記的一級抗體。例如,在免疫染色試驗中,需要研究2個或2個以上抗原的相對位置時,常需要純化抗體並用不同標記物標記,這樣能比較它們的相對位置。此時使用間接法不合適。因爲間接法是用標記二抗來給未標記的一抗定位。又如,有時一抗需要標記,而該樣本中又有大量無關抗體,它們能干擾對一抗的檢測,此時用間接法也不合適。用鼠源性單抗對鼠組織抗原進行定位時,也會出現這種情況。此時需要純化一抗,並直接按下述方法進行標記。

檢驗技師考點:純化抗體

  簡介:

製備高特異性、高效價的抗體是實驗免疫學技術的基礎,抗體質量的高低將直接影響試驗的`成敗。 通過不同方法制備的抗體往往與多種雜蛋白混雜在一起,爲了獲得成分相對單一的抗體或將抗體用於特定的用途,就需要進行抗體純化。從成分的角度分析, 抗體分子是一類蛋白質分子,與其他蛋白質一樣,它有一定的等電點、溶解度、荷電性及疏水性,可以用電泳、 鹽析沉澱或其他層析技術進行分離、 純化。

純化抗體通常用於直接檢測抗原。此時抗體標記有一個易於鑑定的標記物,用於結合和檢測所研究的抗原。在間接檢測抗原方法中,一抗不被標記,而是用標記的二抗(一種抗免疫球蛋白抗體)來檢測。一般而言,建議使用間接法。因爲許多商家能夠提供可靠的標記二抗,用間接法不僅省力,結果同樣可靠。 儘管如此,有幾種方法需要標記的一級抗體。例如,在免疫染色試驗中,需要研究2個或2個以上抗原的相對位置時,常需要純化抗體並用不同標記物標記,這樣能比較它們的相對位置。此時使用間接法不合適。因爲間接法是用標記二抗來給未標記的一抗定位。又如,有時一抗需要標記,而該樣本中又有大量無關抗體,它們能干擾對一抗的檢測,此時用間接法也不合適。用鼠源性單抗對鼠組織抗原進行定位時,也會出現這種情況。此時需要純化一抗,並直接按下述方法進行標記。