溶血反應的檢測試劑
(一)補體
檢測血清補體水平或補體活性時需要從受檢者採血及分離血清。做補體結合試驗時多采用豚鼠血清作爲實驗用補體的來源。因爲補體在體外極易衰變，所以檢測補體活性的血清標本和作爲補體試劑的血清必須新鮮。
受檢者一般做靜脈採血，在動物可做心臟採血。血清分離後應及時使用，最好在當日用完。必須保存時採用小量分裝的辦法，置-70℃下可保存數月，避免反覆凍融。凍乾製品可長期保存，但其活性都不同程度地比新鮮血清降低。
以豚鼠血清作補體來源時，應考慮到個體差異。爲了確保血清中補體的有效活性，必須取3只以上豚鼠的血清混合後使用。
(二)綿羊紅細胞
從綿羊頸靜脈無菌採血，抽出血液後立即小心地注入放有玻璃珠的無菌乾燥三角燒瓶中，充分旋搖15～20min，以除去纖維蛋白。也可將羊血與等量或2倍量的'Alsever血液保存液混合，既有抗凝作用，又適於儲存;分裝後置4℃，可使用3周。
實驗前，取適量抗凝血，加入8～10倍的生理鹽水，輕輕混勻後2000r/min離心5min;棄上清，沉澱的紅細胞用生理鹽水再洗一次，這時上清爲無色澄清，如顯紅色說明有溶血現象，應更換新鮮羊血;第三次用緩衝液洗滌，棄上清，取壓積紅細胞用緩衝液配製SRBC懸液，使用濃度一般爲2%～5%。爲使紅細胞濃度標準化，可吸取少量紅細胞懸液，中入20～30倍的稀釋液中，在542nm波長比濁，以吸光度爲標準調整紅細胞濃度。
(三)溶血素
溶血素即抗綿羊紅細胞抗體，多是以綿羊紅細胞免疫家兔而得到兔抗血清。一般沒有必要進一步提純抗體，但在試驗前需先進行加熱56℃30min或60℃3min以滅活補體。
由於補體溶血試驗及補體結合試驗均是比較精密的試驗，其結果與溶血素的效價有關，所以試驗需要滴定溶血素效價;在製備抗血清的過程中，於動物採血前和分離抗血清後也需要滴定溶血素效價。
1.溶血素稀釋稀釋溶血素時，要先對效價有個大概的估計，以便確定稀釋度的範圍。動物採血前滴定時稀釋範圍要稍大些，實驗前的滴定便以原先的記錄作爲參考(溶血素的效價多在數千單位以上)。溶血素稀釋一般不採用連續倍比稀釋法，因爲稀釋到最後時跨度太大，不容易確定單位。爲了便於操作，現舉例按表14-1配製不同稀釋度的溶血素。
2.效價滴定將稀釋好的溶血素及其他試劑按表14-2所示逐步加入到各試管中，放置37℃水浴，不要蓋上水浴箱的蓋子，以免蓋子上冷凝的水蒸氣滴入試管內引起非補體性溶血。30min後取出觀察結果。
溫育反應後，完全溶血的試管內液體紅色透明，放置一段時間後管底無細胞沉澱，離心後可見少許細胞碎渣。不溶血的管內液體渾濁;放置後可見紅細胞沉澱，上清無色透明。不同程度的不完全溶血介於兩者的中間變化態。
按照以上標準，以產生完全溶血的最高稀釋管爲最大有效反應管，以該管的溶血素稀釋倍數爲溶血素產效價。例如表14-2中的溶血素效價應爲1:4000;在1:4000稀釋的情況下，反應液中所含溶血素的的量爲1U/ml。
做補體活性測定或補體結合試驗時，一般使用2U/ml溶血素(在本例做1:2000稀釋)，與SRBC懸液等體積混合。
(四)稀釋緩衝液
磷酸緩衝液或巴比妥緩衝液等均可用於溶血試驗，pH值應調至7.2～7.4之間。另加入適量氯化鈉以保持等滲，並適當地加入一些鈣離子和鎂離子，這是補體活化所不可缺少的。有的配方還加入0.1%的明膠以使蛋白溶液穩定;加入0.01%NaN3可以防腐，利於較長時間保存。
