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尿液化學成分檢查項目之一
尿液蛋白爲尿液化學成分檢查中最重要的項目之一。正常人的腎小球濾液中存在小分子量的蛋質，在雙月刊牢牢曲小管時絕大部分又被重吸收，因此終尿中的蛋白質含量很少，僅爲30-130mg/24h.隨機一次尿中蛋白質爲0.80mg/L.尿蛋折定性試驗呈陰性反應。
當尿液中蛋白質超過正常範圍時稱爲蛋白尿，含量大於0.1g/L時定試驗可陽性。正常時分子量在7萬以上的蛋白質不能通過腎小球濾過膜，而分子量1-3萬的低分子蛋白質雖大多可通過濾過膜，但又爲近曲小管重吸收，由於腎小管細胞分泌的蛋白如TammHorsfall蛋白(T-H蛋白)、SigA等以及下尿路分泌的粘液蛋白可進入尿中。
尿蛋白質 2/3來自血漿蛋白，其中白蛋白約佔40%其餘爲小分子量的酶(溶菌酶等、)肽類、激素類先進，如將正常人尿液濃縮後再經免疫電泳，可按蛋白質的分子量量大小分成以下3組：
①高分子量蛋白質：分子量大於9萬，含量極微，包括由腎髓袢升支極及遠曲小管上皮細胞分泌的T-H糖蛋白及分泌型IGA等;
②中分子量蛋白質：分子量4-9萬，是以白蛋白爲主的血漿蛋白，可佔尿蛋月總數的1/2-2/3;③低分子量蛋白質：分子量小於4萬，絕大多數已在腎小管重吸收。因此尿中含量極少，如免疫球蛋白FC片段，遊離輕鏈、α1微球蛋白、β2微球蛋白等。
熒光色素
許多物質都可產生熒光現象，但並非都可用作熒光色素。只有那些能產生明顯的熒光並能作爲染料使用的有機化合物才能稱爲免疫熒光色素或熒光染料。常用的熒光色素有：
1.異硫氰酸熒光素(fluoresceinisothiocyanate，FITC)爲黃色或橙黃色結晶粉末，易溶於水或酒精等溶劑。分子量爲 389.4，最大吸收光波長爲490——495nm，最大發射光波長520——530nm，呈現明亮的黃綠色熒光，結構式如下：有兩種同分異結構，其中異構體Ⅰ型在效率、穩定性、與蛋白質結合能力等方面都更好，在冷暗乾燥處可保存多年，是應用最廣泛的熒光素。其主要優點是：①人眼對黃綠色較爲敏感，②通常切片標本中的綠色熒光少於紅色。
2.四乙基羅丹明(rhodamine，RIB200)爲橘紅色粉末，不溶於水，易溶於酒精和丙酮。性質穩定，可長期保存。結構式如下：最大吸收光波長爲570nm，最大發射光波長爲595～600nm，呈橘紅色熒光。
3.四甲基異硫氰酸羅丹明(tetramethylrhodamineisothiocyanate，TRITC)結構式如下：最大吸引光波長爲 550nm，最大發射光波長爲620nm，呈橙紅色熒光。與FITC的翠綠色熒光對比鮮明，可配合用於雙重標記或對比染色。其異硫氰基可與蛋白質結合，但熒光效率較低。
免疫熒光原理
免疫學的基本反應是抗原-抗體反應。由於抗原抗體反應具有高度的特異性，所以當抗原抗體發生反應時，只要知道其中的一個因素，就可以查出另一個因素。免疫熒光技術就是將不影響抗原抗體活性的熒光色素標記在抗體(或抗原)上，與其相應的抗原(或抗體)結合後，在熒光顯微鏡下呈現一種特異性熒光反應。
直接法：將標記的特異性熒光抗體，直接加在抗原標本上，經一定的溫度和時間的染色，用水洗去未參加反應的多餘熒光抗體，室溫下乾燥後封片、鏡檢。
間接法：如檢查未知抗原，先用已知未標記的特異抗體(第一抗體)與抗原標本進行反應，用水洗去未反應的抗體，再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應，使之形成抗原—抗體—抗體複合物，再用水洗去未反應的標記抗體，乾燥、封片後鏡檢。如果檢查未知抗體，則表明抗原標本是已知的，待檢血清爲第一抗體，其它步驟的抗原檢查相同。
標記的抗抗體是抗球蛋白抗體，同於血清球蛋白有種的特異性，如免疫抗雞血清球蛋白只對雞的球蛋白髮生反應，因此，製備標記抗體適用於雞任何抗原的診斷。
免疫熒光技術特點
該技術的主要特點是：特異性強、敏感性高、速度快。主要缺點是：非特異性染色問題尚未完全解決，結果判定的客觀性不足，技術程序也還比較複雜。
熒光免疫法按反應體系及定量方法不同，還可進一步分做若干種。與放射免疫法相比，熒光免疫法無放射性污染，並且大多操作簡便，便於推廣。國外生產的TDM用試劑盒，有相當一部分即屬於此類，並且還有專供TDM熒光偏振免疫分析用的自動分析儀生產。
由於一般熒光測定中的本底較高等問題，熒光免疫技術用於定量測定有一定困難。新發展了幾種特殊的熒光免疫測定，與酶免疫測定和放射免疫分析一樣，在臨牀檢驗中應用。
抗原抗體反應
將抗原(標準品和受檢標本)、標記抗原和抗血清按順序定量加入小試管中，在一定的溫度下進行反應一定時間，使競爭抑制反應達到平衡。不同質量的抗體和不同含量的抗原對溫育的溫度和時間有不同的要求。
如受檢標本抗原含量較高，抗血清的親和常數較大，可選擇較高的溫度(15～37℃)進行較短時間的溫育，反之應在低溫(4℃)作較長時間的溫育，形成的抗原抗體複合物較爲牢固。
抗血清的檢定
含有特異性抗體的抗血清是放射免疫分析的主要試劑，常以抗原免疫小動物誘發產生多克隆抗體而得。抗血清的質量直接影響分析的靈敏度和特異性。抗血清質量的指標主要有親和常數、交叉反應率和滴度。
1.親和常數親和常數(affinityconstant)常用K值表示。它反映抗體與相應抗原的結合能力。K值的單位爲mol/L，即表示 1mol抗體稀釋至若干L溶液中時，與相應的抗原結合率達到50%.抗血清K值越大，放射免疫分析的`靈敏度、精密和準確度越佳。抗血清的K值達到 109～1012mol/L才適合用於放射免疫分析。
2.交叉反應率放射免疫分析測定的物質有些具有極爲類似的結構，例如甲狀腺素的T3、T4，雌激素中的雌二醇、雌三醇等。針對一種抗原的抗血清往往對於其類似物會發生交叉反應。
因此交叉反應率反映抗血清的特異性，交叉反應率過大將影響分析方法的準確性。交叉反應率的測定方法爲用與抗血清相應抗原及其類似物用同法進行測定，觀察置換零標準管50%時的量。以T3抗血清爲例，置換零標準50%T3爲1ng，其類似物T4則需 200ng，則其交叉反應率爲：1/200=0.5%.
3.滴度滴度係指將血清稀釋時能與抗原發生反應的最高稀釋度。它反映抗血清中有效抗體的濃度。在放射免疫分析中滴度爲在無受檢抗原存在時，結合50%標記抗原時抗血清的稀釋度。
胃粘液|碳酸氫鹽
1.粘液(mucus)胃粘膜以常處於與胃液接觸中，而只有食物被消化，胃組織不受損傷，其部分原因是因爲覆蓋於全胃表面的一層膠狀粘液的保護作用。這種膠狀物形成一種粘液屏障與胃粘膜屏障不同，保護胃沾膜免受酸、胃蛋白酶及其它的害物質侵蝕。這還人滑潤作用，使胃粘膜不受機械性損傷。粘液不能阻擋水和電解質的通透。在基礎狀況下對胃酸有一定的中和作用，但在刺激後胃酸分泌時，此時作用微不足道。
2.碳酸氫鹽：是覆蓋於胃表面的粘液一碳酸氫鹽屏障，對粘膜起保護作用，這個屏障作爲含有PH梯度的膠狀物爲上皮表面提供了一處中性微環境。碳酸氫鹽由胃表面粘液細胞所分泌。
胃液中鹽酸
胃液中鹽酸以解離的遊離酸與結合的結合酸兩種形式在，兩者加在一起爲交響曲鹽酯。此外胃液中還有極少的可以忽略不計的其它酸性物質，如有機酸乳酸、乙酸等及酸性鹽酸性磷酸鹽。這些酸總和起來以總酸度表示，但目前多以總鹽酸分泌量表示胃液酸排出量。
鹽酸的主要消化功能是胃蛋白酶原的激活提供所必須的高度酸化條件，同時也能有限地水解少許多肽和多糖。胃酸還殺死食入細菌的能力，此錢鹽酸進入小腸後可以促進胰液、腸液和膽汁的的分泌促進對鈣和鐵等物質的吸收。胃液過多或過少均可出現許多症狀，或成爲疾病的原因之一。測定胃鹽酸分泌量是常用的測量胃分泌功能的試驗。
